Anticorpi leucocitari umani (HLA) sunt molecule de suprafață celulară care se găsesc pe toate celulele nucleate. Fiecare individ are un set unic al acestor antigene, jumătate moștenit de la fiecare părinte, iar tipizarea lor devine importantă înainte de transplantul de organe. Tiparea este, de asemenea, utilizată pentru a identifica markerii pentru boli specifice, cum ar fi HLA B27, despre care se știe că este strâns asociat cu afecțiuni precum spondilita anchilozantă.
Sunt recunoscute două clase principale de antigeni HLA: HLA clasa I și HLA clasa II. Antigenele HLA clasa I (A, B și C la om) fac ca fiecare celulă să poată fi recunoscută ca fiind „proprie”, în timp ce antigenele HLA clasa II (DR, DP și DQ la om) stimulează sistemul imunitar.1 Ambele au fost implicate în respingerea organelor transplantate.
Trei procese principale sunt folosite pentru a efectua tipizarea HLA. Primul este metoda mai convențională de citotoxicitate serologică, în care probe mici de limfocite (prelevate din sânge sau splină) sunt adăugate pe plăci Terasaki. Aceste plăci conțin godeuri individuale care conțin diferiți anticorpi specifici (fie din seruri materne, fie din anticorpi monoclonali fabricați). Cele mai bune celule pentru tipizarea de clasă II sunt limfocitele B, iar tipizarea de clasă I poate fi efectuată cu restul leucocitelor. Perlele magnetice sunt folosite pentru a purifica celulele necesare din sânge sau splină.
Dacă antigenul HLA și anticorpul specific se leagă și se adaugă complement, celulele din acel gode vor fi ucise. Modelul de godeuri care prezintă această moarte celulară permite deducerea combinației de antigene HLA care au fost prezente pe celulele țesutului original.
O altă metodă potențială utilizată pentru tipizarea HLA este citometria în flux, în special atunci când se caută alele specifice. Aici leucocitele proaspete nucleate sunt adăugate la anticorpi monoclonali care sunt marcați cu o moleculă care este fluorescentă. Celulele cu antigene de suprafață care se leagă de anticorp devin fluorescente. Citometrul de flux detectează celulele fluorescente prin detectarea luminii emise de acestea atunci când trec printr-un fascicul laser. Citometria în flux durează aproximativ 30 de minute – timpul necesar pentru a pregăti celulele și apoi pentru a pune în funcțiune aparatul.
Un al treilea procedeu câștigă favorabilitate în cazul în care este necesară o tipizare foarte detaliată – de exemplu, pentru o potrivire precisă în transplantul de măduvă osoasă. Acest proces implică extragerea ADN-ului din celule și amplificarea genelor care codifică pentru peptidele HLA folosind tehnici de reacție în lanț a polimerazei. Genele pot fi puse în corespondență cu secvențele de nucleotide HLA cunoscute care se găsesc stocate în mai multe baze de date ale băncilor de gene, inclusiv în baza de date IMGT/HLA.
.