4.2.1.2 Metodi spettrometrici visibili
CBZ e PHT sono due AED usati contemporaneamente. In questo documento, viene descritto un metodo di calibrazione PLS per la determinazione spettrofotometrica simultanea di CBZ e PHT nel plasma. Le miscele binarie standard di CBZ e PHT sono state risolte applicando il PLS-1 ai loro spettri UV. Poi, le soluzioni standard binarie, spiked al plasma, sono state preparate, e dopo l’estrazione dei farmaci, il loro spettro UV corrispondente è stato analizzato dalla regressione PLS per calcolare la concentrazione dei farmaci nel plasma sconosciuto. Una procedura di convalida incrociata leave-one-out è stata impiegata per trovare il numero ottimale di variabili latenti utilizzando il PLS. Un metodo HPLC è stato applicato anche per la determinazione simultanea di due farmaci nel plasma e nel metanolo. I recuperi medi ottenuti da PLS erano 98,4 e 98,2 per CBZ e PHT e quelli ottenuti da HPLC erano 100,1 e 101,7, rispettivamente. Anche se il metodo HPLC ha mostrato prestazioni migliori di PLS, è stato trovato che i risultati ottenuti da PLS erano paragonabili a quelli ottenuti dal metodo HPLC.
Due metodi spettrofotometrici sono proposti per il dosaggio di OXC in massa e forme di dosaggio utilizzando il reagente fenolo di Folin-Ciocalteu (FCP) e 3-metil-2-benzotiazolinone idrazina cloridrato (MBTH) come reagenti. Il primo metodo prevede l’aggiunta del reagente FCP all’OXC in mezzo alcalino seguita dalla misurazione dell’assorbanza a 760 nm (metodo A), e l’altro prevede l’aggiunta di un volume fisso di MBTH dopo il trattamento dell’OXC con cloruro ferrico e la misurazione dell’assorbanza a 456 nm (metodo B). In entrambi i metodi, la quantità di cromogeno formata corrisponde alla quantità di OXC e l’assorbanza misurata è risultata aumentare linearmente con la concentrazione di OXC, il che è confermato dai coefficienti di correlazione di 0,9985 e 0,9984 per i metodi A e B, rispettivamente. I sistemi obbediscono alla legge di Beer per 5-30 e 10-50 μg/mL per i metodi A e B, rispettivamente. L’assorbibilità molare apparente è stata calcolata a 8,06 × 103 e 3,126 × 103 L/mol/cm per i metodi A e B, rispettivamente. Il LOD e il LOQ sono stati calcolati a 1,6 e 5 μg/mL per il metodo A e 3 e 10 μg/mL per il metodo B. Le imprecisioni inter e intraday dei metodi sono state trovate nell’intervallo di 1,1-1,7% e 0,9-1,1% per il metodo A, e 1,1-1,9% e 0,6-0,9% per il metodo B. La precisione variava tra 98,9-99,7% e 99,3-100,1% per i metodi A e B, rispettivamente. Non è stata osservata alcuna interferenza dai comuni eccipienti farmaceutici. I metodi sono stati applicati con successo al dosaggio di OXC nelle preparazioni in compresse.
CBZ subisce una biotrasformazione enzimatica attraverso l’epossidazione con la formazione del suo metabolita, CBZ-E. Un semplice metodo chemiometrico assistito da spettrofotometria è stato proposto per la determinazione simultanea di CBZ e CBZ-E nel plasma. Una procedura di estrazione liquida è stata utilizzata per separare gli analiti dal plasma, e gli spettri di assorbanza UV delle soluzioni risultanti sono stati sottoposti a regressione PLS. Il numero ottimale di variabili latenti PLS è stato selezionato in base ai valori PRESS della convalida incrociata leave-one-out. Un metodo HPLC è stato impiegato anche per il confronto. I rispettivi recuperi medi per l’analisi di CBZ e CBZ-E nelle miscele sintetiche erano 102,57 (± 0,25) % e 103,00 (± 0,09) % per PLS e 99,40 (± 0,15) % e 102,20 (± 0,02) %. Le concentrazioni di CBZ e CBZ-E sono state anche determinate in cinque pazienti usando i metodi PLS e HPLC. I risultati hanno mostrato che i dati ottenuti con il PLS erano comparabili a quelli ottenuti con il metodo HPLC.
Un metodo selettivo e sensibile è stato sviluppato per la determinazione degli anticonvulsivanti vigabatrin (I) (CAS 60643-86-9) e gabapentin (II) (CAS 60142-96-3). Il metodo si basa sulla condensazione dei farmaci attraverso i loro gruppi amminici con acetilacetone e formaldeide secondo la reazione di Hantzsch che produce i derivati diidropiridinici altamente fluorescenti. Il colore giallo-arancione è stato misurato anche spettrofotometricamente a 410 e 415 nm per I e II, rispettivamente. Le trame assorbanza-concentrazione erano rettilinee sulle gamme 10-70 e 20-140 μg/mL per I e II, rispettivamente. Per quanto riguarda la fluorescenza-concentrazione trame, erano lineari sulle gamme 0.5-10 e 2.5-20 μg/mL con limiti di rilevamento minimo (S / N = 2) di 0,05 μg / ml (~ 2,1 × 10- 8 mol / L) e 0,1 μg / ml (~ 5,8 × 10- 7 mol / L) per I e II, rispettivamente. Il metodo spettrofotometrico è stato applicato alla determinazione di I e II nelle loro compresse. I recuperi percentuali ± SD (n = 6) erano 99,45 ± 0,13 e 98,05 ± 0,53, rispettivamente. Il metodo spettrofluorimetrico è stato applicato con successo alla determinazione di I e II nell’urina umana e nel plasma. I recuperi % ± SD (n = 5) erano 98,77 ± 0,29 e 98,39 ± 0,53 per le urine e 99,32 ± 0,74 e 98,90 ± 0,96 per il plasma, per I e II, rispettivamente. Nessuna interferenza è stata riscontrata con i farmaci co-somministrati: acido valproico (CAS 99-66-1), difenilidantoina (CAS 57-41-0), fenobarbital (CAS 50-06-6), carbamazepina (CAS 298-46-4), clonazepam (CAS 1622-61-3), clobazam (CAS 22316-47-8), o cimetidina (CAS 51481-61-9). Viene suggerita una proposta del percorso di reazione. I vantaggi dei metodi proposti rispetto al metodo esistente sono discussi.
Uno spettrofotometro nel vicino infrarosso (IR), un’ottica di integrazione e un supercomputer a vettori paralleli sono impiegati per sviluppare un modello matematico che predice il tasso di dissoluzione di singole compresse intatte dagli spettri nel vicino infrarosso (r2 = 0,985). Ogni compressa può essere analizzata non distruttivamente dallo spettrofotometro in meno di 1 minuto. Il modello permette di utilizzare centinaia di lunghezze d’onda near-IR nella determinazione del tasso di dissoluzione, portando ad una maggiore accuratezza.
Un campione di 0,5 mL di siero, contenente diversi AEDs, singolarmente o in combinazione, è stato reso alcalino, sovrapposto con isoottano, e vaporizzato in presenza di KMnO4. Gli spettri dei prodotti ossidati nello strato organico sono stati registrati nell’intervallo UV. Il fenobarbitone e il primidone ossidati non mostrano alcun picco di assorbimento; il diazepam un delta-max a 228 nm; la fenitoina a 247 nm; e la carbamazepina a 247 e 372 nm. Di conseguenza, il fenobarbitone e il diazepam non interferiscono nella quantificazione della fenitoina, ma la carbamazepina sì. Il contributo della carbamazepina a 247 nm è stato calcolato dall’assorbimento a 372 nm e dal rapporto dei suoi coefficienti di estinzione molare alle due lunghezze d’onda. Questo è stato sottratto dai valori totali di A247 per ottenere i valori reali dovuti alla fenitoina. Così, è stato sviluppato un metodo per l’analisi simultanea di carbamazepina e fenitoina in un unico campione.
Carbamazepina e 5,5-difenilidantoina sono estratti simultaneamente da 100 a 200 μL di sangue con 1,2-dicloroetano. La 5,5-difenilidantoina viene rimossa con un lavaggio in alcali in una sola fase. Il dicloroetano viene ulteriormente lavato con acido e poi evaporato a secco. La 5,5-difenilidantoina viene determinata nel lavaggio in alcali mediante una procedura con benzofenone; la carbamazepina viene determinata nel residuo secco mediante la procedura con 9-metilacridina descritta in precedenza. Il metodo combinato è rapido, affidabile e ha una soglia di rilevamento inferiore a 0,1 mg/100 mL per ogni droga.
Si descrive una procedura spettrofotometrica UV per la microdeterminazione della carbamazepina nel sangue che si basa sul metodo originale della 9-metilacridina proposto da K.H. Beyer, K. Klinge, Arzneim. Forsch. 19 (1969) 1759-1760). La carbamazepina viene estratta dal sangue con diclorometano, che viene poi lavato con alcali e acido. Un’aliquota dell’estrattore viene evaporata a secco e il residuo viene riscaldato brevemente con acido cloridrico a 150°C. Dopo la rimozione dell’interferenza aspecifica con n-eptano, l’assorbanza del prodotto di riarrangiamento catalizzato dall’acido (9-metilacridina) viene determinata a 258 nm. La procedura risultante è rapida, affidabile, sensibile e specifica. Richiede 100-200 μL di campione per una singola stima e ha una soglia di rilevamento inferiore a 0,1 mg/100 mL. Si conclude che il metodo è adatto all’uso clinico di routine.
Si descrive un metodo gascromatografico diretto specifico per determinare la carbamazepina e, semiquantitativamente, la 10,11-epoxy carbamazepina nel siero. Il recupero medio della carbamazepina è del 98% e l’errore sulla determinazione in doppio è del ± 4%. Il metodo viene confrontato con il classico metodo spettrofotometrico di Herrmann. Nel materiale di 103 pazienti, la concentrazione sierica media di carbamazepina era 25,5 ± 12,8 μmol/L con GLC e 23,0 ± 12,6 μmol/L con la spettrofotometria. La differenza era altamente significativa. Il volume del campione di sangue è 1/10 di quello necessario nella spettrofotometria.