Effect of Digibind™ and DigiFab™ on Serum Digoxin Measurement
Digibind e DigiFab sono frammenti Fab di anticorpi antidigossina usati nel trattamento di un’overdose acuta di digossina potenzialmente letale. Digibind, il primo antidoto disponibile per il trattamento dell’overdose di digossina, è disponibile negli Stati Uniti dal 1986 (Glaxo Wellcome Inc.), e più recentemente, nel 2001, la Food and Drug Administration degli Stati Uniti (FDA) ha approvato DigiFab per il trattamento delle overdose di digossina. Digibind viene prodotto immunizzando le pecore con un coniugato di albumina umana alla digestione della digossina, seguito dall’isolamento dell’anticorpo specifico alla digossina dal sangue e dalla digestione della papaina per generare il frammento Fab dell’anticorpo. Il frammento Fab dell’anticorpo antidigossina viene poi ulteriormente purificato. DigiFab viene preparato iniettando nelle pecore la digossina-dicarbossimetilammina, un analogo della digossina, seguito dall’isolamento dell’anticorpo antidigossina dal sangue, dalla digestione con papaina e dalla purificazione del frammento Fab mediante cromatografia di affinità. Il peso molecolare di DigiFab (46 000 Da) è simile al peso molecolare di Digibind (46 200 Da). Di solito il dosaggio di Digibind è 80 volte il carico corporeo di digossina; se non sono noti né la dose ingerita né la concentrazione plasmatica di digossina, allora 380 mg di Digibind vengono solitamente iniettati nel paziente. L’emivita del frammento Fab nell’uomo è di 12-20 ore, ma può essere prolungata nei pazienti con insufficienza renale. Digibind e DigiFab sono equivalenti nella loro capacità di legare la digossina. Inoltre, entrambi i composti sono in grado di legare la DLIS endogena.
Oltre alla digossina, Digibind dimostra la capacità di neutralizzare il cardenolide che è glicosilato in posizione 3 (digossina e ouabain) con una potenza simile, indipendentemente dalle sostituzioni nella parte steroidea della molecola. Pertanto, Digibind è efficace nel trattamento dell’avvelenamento da piante con la digitale, che contiene vari glicosidi cardiaci. Rich et al. hanno dimostrato il successo del trattamento di un uomo di 22 anni con Digibind che è stato sovradosato intenzionalmente con un estratto di digitale fatto in casa. Inoltre, Digibind è in grado di neutralizzare sia i glicosidi cardiaci che i rispettivi agliconi – per esempio l’oleandrina, il componente attivo dell’estratto di oleandro – ed è efficace nel trattamento della tossicità dell’oleandro che mette in pericolo la vita. Inoltre, Digibind può essere efficace nel trattamento dell’overdose da Chan Su – essendo Chan Su una medicina cinese contenente bufalina e altri steroidi cardioattivi della classe dei bufadienolidi – ma l’efficacia di Digibind nel trattamento dell’avvelenamento da Chan Su è scarsa rispetto alla sua efficacia nel trattamento dell’overdose da digossina. Ciò è dovuto alla scarsa specificità del Digibind nel neutralizzare la cinobufagina e la cinobufatolina, che sono anch’esse costituenti del Chan Su, così come il veleno di rospo.
Sia il Digibind che il DigiFab interferiscono con la misurazione della digossina nel siero utilizzando saggi immunologici. L’entità dell’interferenza dipende dal disegno del test e dalla specificità dell’anticorpo antidigossina. Il test immunoenzimatico a microparticelle della digossina (MEIA sull’analizzatore AxSYM, Abbott Laboratories, Abbott Park, IL) e il test della digossina Stratus hanno dimostrato valori di digossina superiori alla concentrazione di digossina libera misurata in presenza di Digibind. McMillin et al. hanno studiato l’effetto di Digibind e DigiFab su 13 diversi dosaggi immunologici della digossina. L’interferenza positiva in presenza e in assenza di digossina è stata osservata con Digibind e DigiFab, anche se l’entità dell’interferenza era leggermente inferiore con DigiFab. L’entità dell’interferenza variava significativamente con ciascun metodo, mentre i metodi IMMULITE®, Vitros®, Dimension® e Access® per la digossina hanno mostrato le maggiori interferenze. Interferenze minime sono state osservate con i metodi FPIA, MEIA, SYNCHRON e CEDIA. Gli autori hanno anche commentato che il monitoraggio della digossina libera (nell’ultrafiltrato privo di proteine) elimina questa interferenza perché sia Digibind che DigiFab, a causa del loro peso molecolare approssimativo di 46 000 Da, sono assenti nell’ultrafiltrato privo di proteine. Digibind e DigiFab non interferiscono con la misurazione della digossina nel siero utilizzando un metodo cromatografico, come la cromatografia liquida combinata con la spettrometria di massa. Kanno et al. hanno descritto un metodo per l’analisi simultanea di digossina, digitoxina e composti correlati utilizzando la cromatografia liquida combinata con la spettrometria di massa tandem. Oiestad et al. hanno anche descritto un metodo di cromatografia liquida-spettrometria di massa in tandem (LC-MS/MS) per la digossina e la digitoxina nel sangue intero in casi di autopsia. I campioni sono stati preparati mediante estrazione liquido-liquido utilizzando acetato di etile/eptano/diclorometano (3 : 1 : 1 in volume), e le separazioni cromatografiche sono state ottenute utilizzando una colonna a fase inversa C-18. La rilevazione di massa è stata eseguita mediante elettrospray in modalità di ioni positivi su addotti di ammonio, e la digossina deuterata (digossina-d3) è stata utilizzata come standard interno. Tuttavia, i metodi cromatografici sono raramente utilizzati nei laboratori clinici, anche se i laboratori di tossicologia forense e i laboratori criminali coinvolti nelle indagini sulla morte sono dotati di tali analizzatori.