4.2.1.2 Synliga spektrometriska metoder
CBZ och PHT är två AED som används samtidigt. I denna artikel beskrivs en PLS-kalibreringsmetod för samtidig spektrofotometrisk bestämning av CBZ och PHT i plasma. Binära standardblandningar av CBZ och PHT har lösts upp genom tillämpning av PLS-1 på deras UV-spektra. Därefter framställdes de binära standardlösningarna, spikade till plasma, och efter extraktion av drogerna analyserades deras motsvarande UV-spektrum med PLS-regression för att beräkna koncentrationen av drogerna i okänd plasma. Ett förfarande med korsvalidering utan undantag användes för att hitta det optimala antalet latenta variabler med hjälp av PRESS. En HPLC-metod användes också för samtidig bestämning av två läkemedel i plasma och i metanol. De genomsnittliga återvinningarna som erhölls med PLS var 98,4 och 98,2 för CBZ och PHT och de som erhölls med HPLC var 100,1 respektive 101,7. Även om HPLC-metoden visade bättre prestanda än PLS, konstaterades det att de resultat som erhölls med PLS var jämförbara med dem som erhölls med HPLC-metoden .
Två spektrofotometriska metoder föreslås för analys av OXC i bulk och doseringsformer med användning av Folin-Ciocalteus fenolreagens (FCP) och 3-metyl-2-benzothiazolinonhydrazinhydrazinhydraklorid (MBTH) som reagens. Den första metoden innebär att FCP-reagenset tillsätts till OXC i alkaliskt medium följt av mätning av absorbansen vid 760 nm (metod A), och den andra innebär att en fast volym MBTH tillsätts efter behandling av OXC med järnklorid och mätning av absorbansen vid 456 nm (metod B). I båda metoderna motsvarar mängden kromogen som bildas mängden OXC och den uppmätta absorbansen visade sig öka linjärt med koncentrationen av OXC, vilket bekräftas av korrelationskoefficienterna 0,9985 och 0,9984 för metoderna A respektive B. Systemen följer Beers lag för 5-30 och 10-50 μg/ml för metoderna A och B. Den skenbara molära absorptiviteten beräknades till 8,06 × 103 och 3,126 × 103 L/mol/cm för metoderna A och B. LOD och LOQ beräknades till 1,6 och 5 μg/mL för metod A och 3 och 10 μg/mL för metod B. Metodernas inter- och intradagliga precisioner befanns ligga i intervallet 1,1-1,7 % och 0,9-1,1 % för metod A och 1,1-1,9 % och 0,6-0,9 % för metod B. Noggrannheten varierade mellan 98,9-99,7 % och 99,3-100,1 % för metoderna A och B. Ingen interferens observerades från vanliga farmaceutiska hjälpämnen. Metoderna tillämpades framgångsrikt för bestämning av OXC i tablettberedningar.
CBZ genomgår enzymbiotransformation genom epoxidering med bildning av dess metabolit, CBZ-E. En enkel kemometrisk spektrofotometrisk metod har föreslagits för samtidig bestämning av CBZ och CBZ-E i plasma. En vätskeextraktion användes för att separera analyterna från plasma, och UV-absorptionsspektren för de resulterande lösningarna genomgick PLS-regression. Det optimala antalet latenta PLS-variabler valdes i enlighet med PRESS-värdena för leave-one-out cross-validation. En HPLC-metod användes också som jämförelse. De genomsnittliga återvinningarna för analys av CBZ och CBZ-E i syntetiska blandningar var 102,57 (± 0,25)% och 103,00 (± 0,09)% för PLS och 99,40 (± 0,15)% och 102,20 (± 0,02)%. Koncentrationerna av CBZ och CBZ-E bestämdes också hos fem patienter med PLS- och HPLC-metoderna. Resultaten visade att de data som erhölls med PLS var jämförbara med dem som erhölls med HPLC-metoden.
En selektiv och känslig metod utvecklades för bestämning av de antikonvulsiva läkemedlen vigabatrin (I) (CAS 60643-86-9) och gabapentin (II) (CAS 60142-96-3). Metoden bygger på kondensation av läkemedlen genom deras aminogrupper med acetylaceton och formaldehyd enligt Hantzsch-reaktionen, vilket ger de starkt fluorescerande dihydropyridinderivaten. Den gulorange färgen mättes också spektrofotometriskt vid 410 och 415 nm för I respektive II. Absorbans-koncentrationsdiagrammen var rätlinjiga i intervallet 10-70 och 20-140 μg/mL för I respektive II. Fluorescens-koncentrationsdiagrammen var linjära över områdena 0,5-10 och 2,5-20 μg/mL med minimala detektionsgränser (S/N = 2) på 0,05 μg/mL (~ 2,1 × 10- 8 mol/L) och 0,1 μg/mL (~ 5,8 × 10- 7 mol/L) för I respektive II. Den spektrofotometriska metoden användes för att bestämma I och II i deras tabletter. Den procentuella återvinningen ± SD (n = 6) var 99,45 ± 0,13 respektive 98,05 ± 0,53. Den spektrofluorimetriska metoden tillämpades framgångsrikt för bestämning av I och II i spikad human urin och plasma. Återvinningsprocenten ± SD (n = 5) var 98,77 ± 0,29 och 98,39 ± 0,53 för urin och 99,32 ± 0,74 och 98,90 ± 0,96 för plasma, för I respektive II. Ingen interferens uppstod med de samtidigt administrerade läkemedlen: valproinsyra (CAS 99-66-1), difenylhydantoin (CAS 57-41-0), fenobarbital (CAS 50-06-6), karbamazepin (CAS 298-46-4), klonazepam (CAS 1622-61-3), clobazam (CAS 22316-47-8) eller cimetidin (CAS 51481-61-9). Ett förslag till reaktionsväg föreslås. Fördelarna med de föreslagna metoderna jämfört med befintliga metoder diskuteras.
En spektrofotometer för nära infrarött (IR), integrerande optik och superdator med parallellvektor används för att utveckla en matematisk modell som förutspår upplösningshastigheten för enskilda intakta tabletter från nära IR-spektra (r2 = 0,985). Varje tablett kan analyseras icke-destruktivt med spektrofotometern på mindre än 1 minut. Modellen gör det möjligt att använda hundratals nära-IR-våglängder vid bestämning av upplösningshastigheten, vilket leder till ökad noggrannhet .
Ett 0,5 ml serumprov som innehöll olika AEDs, enskilt eller i kombination, gjordes alkaliskt, överlagrades med isooktan och ångades i närvaro av KMnO4. Spektren av oxiderade produkter i det organiska skiktet registrerades i UV-området. Oxiderat fenobarbiton och primidon uppvisar ingen absorptionstopp, diazepam en delta-max vid 228 nm, fenytoin vid 247 nm och karbamazepin vid 247 och 372 nm. Följaktligen stör inte fenobarbiton och diazepam vid kvantifiering av fenytoin, men det gör däremot karbamazepin. Karbamazepins bidrag vid 247 nm beräknades utifrån absorptionen vid 372 nm och förhållandet mellan dess molära extinktionskoefficienter vid de två våglängderna. Detta subtraherades från de totala A247-värdena för att få fram de faktiska värden som beror på fenytoin. Således har en metod för samtidig analys av karbamazepin och fenytoin i ett enda prov utvecklats.
Karbamazepin och 5,5-difenylhydantoin extraheras samtidigt från 100 till 200 μl blod med 1,2-dikloretan. 5,5-difenylhydantoin avlägsnas genom en enstegstvätt i alkali. Dikloretan tvättas ytterligare med syra och avdunstar sedan till torrhet. 5,5-difenylhydantoin bestäms i alkalivattnet genom ett bensofenonförfarande. Karbamazepin bestäms i den torkade resterna genom det 9-metylacridinförfarande som beskrivits tidigare. Den kombinerade metoden är snabb, tillförlitlig och har en detektionströskel på mindre än 0,1 mg/100 ml för varje läkemedel.
En UV-spektrofotometrisk metod för mikrobestämning av karbamazepin i blod beskrivs, vilken är baserad på den ursprungliga 9-metylacridin-metoden som föreslagits av K.H. Beyer, K. Klinge, Arzneim. Forsch. 19 (1969) 1759-1760). Karbamazepin extraheras från blodet med diklormetan, som sedan tvättas med alkali och syra. En alikvot av extraktionsmedlet förångas till torrhet och restprodukten värms kortvarigt med saltsyra vid 150 °C. Efter avlägsnande av ospecifik interferens med n-heptan bestäms absorbansen hos den syrakatalyserade omlagringsprodukten (9-metylacridin) vid 258 nm. Det resulterande förfarandet är snabbt, tillförlitligt, känsligt och specifikt. Det krävs 100-200 μL prov för en enda uppskattning och har en detektionströskel på mindre än 0,1 mg/100 ml. Slutsatsen är att metoden är lämplig för klinisk rutinanvändning .
En specifik direkt gaskromatografisk metod för att bestämma karbamazepin och, semikvantitativt, 10,11-epoxikarbamazepin i serum beskrivs. Den genomsnittliga återvinningen av karbamazepin är 98 % och felet vid dubbelbestämning är ± 4 %. Metoden jämförs med Herrmanns klassiska spektrofotometriska metod. I material från 103 patienter var den genomsnittliga serumkoncentrationen av karbamazepin 25,5 ± 12,8 μmol/L med GLC och 23,0 ± 12,6 μmol/L med spektrofotometri. Skillnaden var mycket signifikant. Blodprovets volym är 1/10 av den som behövs vid spektrofotometri .
.