Effekt av Digibind™ och DigiFab™ på Serum Digoxin Measurement
Digibind och DigiFab är Fab-fragment av antidigoxin-antikropp som används för att behandla en livshotande akut digoxinöverdos. Digibind, den första antidoten som finns tillgänglig för behandling av digoxinöverdosering, har funnits tillgänglig i USA sedan 1986 (Glaxo Wellcome Inc.), och på senare tid, 2001, godkände USA:s livsmedels- och läkemedelsmyndighet (FDA) DigiFab för behandling av digoxinöverdoser. Digibind framställs genom immunisering av får med konjugat av digoxin och humant albumin, följt av isolering av digoxinspecifika antikroppar från blodet och papainförtäring för att generera antikroppens Fab-fragment. Fab-fragmentet av antidigoxinantikroppen renas sedan ytterligare. DigiFab framställs genom att får injiceras med digoxin-dikarboximetylamin, en digoxinanalog, följt av isolering av antidigoxinantikropp från blodet, papainspjälkning och sedan rening av Fab-fragmentet med hjälp av affinitetskromatografi. Molekylvikten för DigiFab (46 000 Da) liknar molekylvikten för Digibind (46 200 Da). Vanligtvis är Digibind-dosen 80 gånger digoxinkroppsbelastningen; om varken den intagna dosen eller plasmadigoxinkoncentrationen är känd, injiceras vanligtvis 380 mg Digibind till patienten. Halveringstiden för Fab-fragmentet hos människor är 12-20 timmar, men den kan förlängas hos patienter med njursvikt . Digibind och DigiFab är likvärdiga i sin digoxinbindande förmåga. Dessutom kan båda föreningarna binda endogena DLIS .
Förutom digoxin visar Digibind förmågan att neutralisera kardenolid som är glykosylerat i position 3 (digitoxin och ouabain) med liknande styrka, oberoende av substitutioner i molekylens steroiddel. Digibind är därför effektivt vid behandling av växtförgiftning med fingerborgsblomma, som innehåller olika kardeglykosider. Rich et al. har visat att han framgångsrikt behandlat en 22-årig man med Digibind som avsiktligt överdoserats med ett hemmagjort fingerborgsextrakt . Digibind kan dessutom neutralisera både hjärtglykosider och respektive aglykoner – t.ex. oleandrin, den aktiva komponenten i oleanderextrakt – och är effektivt vid behandling av livshotande oleandertoxicitet . Digibind kan dessutom vara effektivt vid behandling av överdosering av Chan Su – Chan Su är ett kinesiskt läkemedel som innehåller bufalin och andra kardioaktiva steroider från klassen bufadienolider – men Digibinds effektivitet vid behandling av Chan Su-förgiftning är dålig jämfört med dess effektivitet vid behandling av överdosering av digoxin. Detta beror på Digibinds dåliga specificitet när det gäller att neutralisera cinobufagin och cinobufatolin, som också ingår i Chan Su, liksom paddelgift .
Både Digibind och DigiFab interfererar med digoxinmätning i serum med hjälp av immunoassays. Storleken på interferensen beror på testutformningen och specificiteten hos antidigoxinantikroppen. Mikropartikelenzymimmunoassay för digoxin (MEIA på AxSYM-analysatorn, Abbott Laboratories, Abbott Park, IL) samt Stratus digoxinassay visade digoxinvärden som var högre än den uppmätta fria digoxinkoncentrationen i närvaro av Digibind . McMillin et al. studerade effekten av Digibind och DigiFab på 13 olika immunoassays för digoxin. Positiv interferens i närvaro och frånvaro av digoxin observerades med Digibind och DigiFab, även om storleken på interferensen var något mindre med DigiFab. Storleken på interferensen varierade avsevärt med varje metod, medan digoxinmetoderna IMMULITE®, Vitros®, Dimension® och Access® uppvisade störst interferens. Minimala interferenser observerades med FPIA-, MEIA-, SYNCHRON- och CEDIA-metoderna. Författarna kommenterade också att kontroll av fritt digoxin (i det proteinfria ultrafiltratet) eliminerar denna interferens eftersom både Digibind och DigiFab, på grund av sin ungefärliga molekylvikt på 46 000 Da, inte förekommer i proteinfritt ultrafiltrat. Digibind och DigiFab stör inte mätningen av digoxin i serum med hjälp av en kromatografisk metod, t.ex. vätskekromatografi i kombination med masspektrometri. Kanno et al. har beskrivit en metod för samtidig analys av digoxin, digitoxin och besläktade föreningar med hjälp av vätskekromatografi i kombination med tandem-masspektrometri . Oiestad et al. har också beskrivit en metod med vätskekromatografi-tandem masspektrometri (LC-MS/MS) för digoxin och digitoxin i helblod för obduktionsfall. Proverna förbereddes genom vätske-vätskeextraktion med hjälp av etylacetat/heptan/diklormetan (3:1:1 i volym), och kromatografiska separationer uppnåddes med hjälp av en C-18-kolonn med omvänd fas. Massdetektering utfördes genom elektrospray i positiv jonläge på ammoniumaddukter, och deutererat digoxin (digoxin-d3) användes som intern standard. Kromatografiska metoder används dock sällan i kliniska laboratorier, även om rättstoxikologiska laboratorier och kriminaltekniska laboratorier som deltar i dödsfallsutredningar är utrustade med sådana analysatorer.