Alai

Är du nyfiken på kemiluminiscens-ELISA, men inte riktigt säker på vad de är eller hur de ska användas? I vår video A Comparison of Colorimetric and Chemiluminescence ELISAs diskuteras hur lika dessa två typer av analyser är och hur de kan förbättra dina laboratorietester.

Se vår video för att:

• Lär dig hur kemiluminiscens- och kolorimetriska ELISA:er mäter biomarkörer
• Utforska olika typer av plattläsare som används för att köra varje analys
• Genomföra komponenterna i varje analys

En jämförelse av kolorimetriska och kemiluminiscens-ELISA:er

Videotranskription

Hej, Jag är Christi Caillouette från ALPCO! Idag ska jag gå igenom en jämförelse mellan kolorimetriska och kemiluminiscenta enzymkopplade immunosorbentanalyser, även kallade ELISA:er.

Princip för Sandwich ELISA:er

Det finns många olika typer av analyser, men de ELISA:er som jag kommer att hänvisa till i dag är sandwichanalyser. Sandwich ELISAs har en antikropp belagd på plattan som specifikt binder till den önskade analyten. Efter ett tvättsteg tillsätts en detektionsantikropp och en enzymmärkning som binder till analyten. Ett substrat tillsätts för att generera en reaktion i brunnarna. Beroende på typ av analys produceras antingen färg eller ljus. Denna reaktion kan mätas med en plattläsare. Graden av färgförändring eller ljus som avges indikerar mängden analyt i provet.

Mätning av okända koncentrationer av biomarkörer

Både kolorimetriska och kemiluminiscenta analyser använder kända standarder för att generera en standardkurva för att mäta den okända koncentrationen av en analyt i prover. Beroende på kitet åstadkoms detta med hjälp av mjukvaruprogram med algoritmer för logistisk kurvanpassning med 4 eller 5 parametrar. Båda typerna av kit ger användaren mätningar av analyten på ett mycket likartat sätt.

Output av kolorimetriska ELISA

Kolorimetriska ELISA kräver en standardiserad mikroplattläsare för att detektera färgförändringsreaktionen mellan enzymmärket och substratet. Läsaren skickar en våglängd, vanligtvis 450 nm, genom varje brunn för att bestämma den optiska densiteten, eller ”OD”-avläsningen av proverna. Beroende på plattläsaren är OD-avläsningen mellan 0 och 4 med tusen decimaler. OD-avläsningarna begränsas av spektrofotometerns kapacitet.

Output av kemiluminescens-ELISA

Kemiluminescens-ELISA kräver en mikroplattläsare som kan mäta luminescens för att detektera ljusreaktionen mellan enzymmärket och substratet. Det ljus som avges av reaktionen i brunnarna överförs via en fiberoptisk kabel till en fotomultiplikator i läsaren som ger ut relativa ljusenheter eller ”RLU”. Beroende på plattläsaren kan RLU:erna variera från hundratals till miljontals. Denna spridning av enheter ger användarna bättre analytisk känslighet och ett bredare dynamiskt område genom att ge mer separation mellan punkterna och minskar begränsningarna för avläsningar av optisk densitet från en standardläsare för mikroplattor.

Kolorimetriska vs. kemiluminiscens-ELISA

Nu ska jag visa vad som generellt sett ingår i våra lådor för kolorimetriska och kemiluminiscens-ELISA-kit och hur dessa kit bara skiljer sig lite åt. Jag kommer att visa dig ALPCOs kolorimetriska ELISA för humant insulin och vår STELLUX Chemi Active GLP-1 (7-36) amid ELISA.

Kolorimetriska ELISA-komponenter för humant insulin

Först börjar vi med ALPCOs kolorimetriska ELISA för humant insulin. I denna kolorimetriska analys får du:

• 96 brunnsmikroplatta – plattan är genomskinlig för att möjliggöra OD-mätningar av färgen i plattan
• Nollstandard
• Standarder, A till E – varje injektionsflaska innehåller kända värden av insulin för att fastställa standardkurvan
• Kontroller – innehåller kända värden av insulin för kvalitetskontroll.
• Enzymmärkt detektionsantikropp
• Vaskbuffertkoncentrat
• TMB-substrat – som under inkubation förändrar brunnarna blått.
• Stopplösning – som tillsätts för att stoppa färgförändringsreaktionen i brunnarna, vilket gör brunnarna gula.
• Och plattförseglare

STELLUX® Chemiluminescence Active GLP-1 (7-36) amide ELISA Components

Nästan har vi ALPCOs STELLUX® Chemi Active GLP-1 (7-36) amide ELISA. I denna kemiluminescensanalys får du:

• Aktiv GLP-1 96 brunnsmikroplatta – Lägg märke till att chemi-plattan är svart i stället för klar. En svart platta minskar bakgrundsljusinterferens när plattan avläses.
• Standarder
• Kontrollnivåer
• Assaybuffert
• Detektorantikropp
• Detektorantikroppsbuffert
• Tvättbuffertkoncentrat
• Streptavidin-HRP – som fungerar som enzymetikett.
• Streptavidin-HRP-buffert – som används för att späda streptavidin-HRP till arbetsstyrka.
• Kemiluminescenssubstrat A
• Kemiluminescenssubstrat B – som kombineras för att skapa kemiluminescenssubstrat med arbetsstyrka, som interagerar med enzymmärket för att generera den kemiluminescerande reaktionen i varje brunn.
• Plattförsegling

Slutsats

Som du kan se skiljer sig vissa av reagenserna mellan kolorimetriska och kemiluminescerande ELISA-test, men principen för varje test är likartad och båda gör det möjligt att mäta koncentrationen av okända analyter i prover. Oavsett om du använder kolorimetriska kit eller är intresserad av att prova våra kemiluminiscenta assays har vi något för dig. ALPCO är här för att hjälpa dig att utforska möjligheterna för ditt labb. För att se vårt fullständiga ELISA-utbud, besök vår webbplats. Vi har många bra resurser som kan hjälpa dig med dina projekt, så ta gärna en titt runt.

Tack för att du tittade på!

Om du vill veta mer om ALPCO:s produkter kan du kontakta Robert Somogyi på [email protected].