Alai

Kravet på tillförlitliga bikistroniska eller multikistroniska vektorer i system för genleverans ligger i framkant inom bio/biomedicinsk teknik. En metod som ger en effektiv samexpression av flera heterologa proteiner skulle vara värdefull för många tillämpningar, särskilt inom den medicinska vetenskapen för behandling av olika typer av sjukdomar. I den här studien har vi utformat och konstruerat en bicistronisk expressionsvektor med hjälp av en självspaltande 2A-peptid som härrör från ett virus från insekten Thosea asigna (T2A). Denna uppvisade den mest effektiva klyvningen av 2A-sekvensen. Två versioner av den T2A-baserade vektorn konstruerades genom att byta ut de DNA-sekvenser som kodar för de intressanta proteinerna, det N-myristoylerade proteinet och det nukleära hemvändande proteinet, uppströms respektive nedströms från 2A-linken. Våra resultat visade att liknande nivåer av mRNA-uttryck hittades och att T2A:s klyvningseffektivitet var 100 %. Trots detta rapporterade vi också de klara bevisen för att det N-myristoylerade proteinet inte kan placeras nedströms från 2A-sekvensen. Eftersom proteinprodukten misslyckas med att translokera till plasmamembranet på grund av den förändrade myristoyleringsprocessen är genpositionen för den T2A-baserade vektorn betydelsefull för den subcellulära lokaliseringen av det N-myristoylerade proteinet. Därför markerades observationen som en försiktighetsåtgärd för användning av 2A-peptiden. För att använda 2A-peptidtekniken för att generera bikistroniskt eller multikistroniskt uttryck bör vektordesignen noggrant övervägas med avseende på transgens position, signalsekvenser och posttranslationella modifieringar av varje enskilt protein.