Abstract
En femårig labradorhane presenterades för GADVASU:s veterinärkliniker med ett primärt klagomål med uppsvälld buk, feber och anorexi. Hunden befanns vara matt med förhöjd rektaltemperatur (104°F), hjärtfrekvens (148 per minut) och andningsfrekvens (58 per minut). Blodutstrykning och PCR-analys visade att hunden var positiv för Babesia gibsoni. Förhöjt bilirubin, alaninamintransferas (ALT), alkaliskt fosfatas (ALP), kreatinin, blodureakvävekväve (BUN), totalt leukocytantal, hypoalbuminemi och hypoproteinemi var hematobiokemiska förändringar. Röntgen- och ultraljudsundersökningar visade ett slipat utseende och ett anekoiskt område i buken.
1. Introduktion
Babesios hos hundar är en av de viktigaste livshotande fästingburna hemoprotozoiska sjukdomarna hos hundar som orsakas av intraerytrocytära protozoiska parasiter av släktet Babesia och som har rapporterats över hela världen och i olika delar av Indien, inklusive delstaten Punjab . En varierande prevalens av både B. canis och B. gibsoni har observerats i Indien (0,66-21,7 %) och i Ludhiana registrerades en prevalens på 5,26 %. Patogenesen för babesios hos hundar varierar i olika regioner, möjligen på grund av variation i patogeniciteten hos olika stammar av Babesia-arter under olika ekologiska förhållanden . Babesiosens svårighetsgrad är relaterad till omfattningen av parasitens replikation i värdens röda blodkroppar med efterföljande celllys. En mängd olika kliniska tecken som anorexi, letargi, ikterus, kräkningar och en markant försämring av kroppskonditionen har observerats tillsammans med varierande klinisk-patologiskt betingade avvikelser som hemoglobinuri, hypoglykemi, syrabasstörningar, azotemi och förhöjda nivåer av leverenzymer . B. gibsoni orsakar dessutom regenerativ hemolytisk anemi och trombocytopeni . Spherocytos och positiva resultat av det direkta Coombs-testet tyder på att det finns en immunomediatkomponent. Trombocytopeni är ett vanligt resultat. I detta meddelande beskriver vi de klinisk-hämatobiokemiska, radiografiska och ultraljudsmässiga observationerna i ett mycket sällsynt fall av peritonealutgjutning på grund av den patogena effekten av Babesia gibsoni-infektion.
2. Fallbeskrivning
En femårig labradorhane av hankön presenterades för Veterinary Teaching Hospital of Guru Angad Dev Veterinary and Animal Sciences University, Ludhiana, juli 2013, med bukspändhet och ihållande anorexi under de senaste två dagarna. Hunden hade uppvisat dålig kroppskondition. Vid den fysiska undersökningen var hunden pyretisk (104°F), med en hjärtfrekvens på 148 slag per minut och en andningsfrekvens på 58 andetag per minut. Slemhinnorna var bleka. Tickor avlägsnades från hunden och identifierades som Rhipicephalus sanguineus.
Blodprover lämnades in för hematologisk och serumbiokemisk analys.
2.1. Hematologisk och biokemisk analys
Hematologisk och biokemisk analys avslöjade måttlig till svår anemi med förhöjt bilirubin, alaninamintransferas (ALT), alkaliskt fosfatas (ALP), kreatinin, blodureakväve (BUN), totalt leukocytantal, hypoalbuminemi och hypoproteinemi var hematobiokemiska förändringar (tabell 1). Kronisk leverinsufficiens vid babesios kan leda till hypoalbuminemi. Hematologiska parametrar tyder på att hunden kan ha blodparasiter eller andra relevanta infektionssjukdomar. Anemins patogenes verkar inbegripa icke-hemolytiska och hemolytiska mekanismer. Hemolys kan innebära proteaser som produceras av den invaderande parasiten, en immunreaktion mot parasiterade celler och/eller oxidativ skada på erytrocyter. MCV-, MCH- och MCHC-värdena låg precis på gränsen till det normala intervallet (tabell 1), vilket tyder på att anemin inte berodde på järnbrist, men MCV- och MCHC-värdena misslyckas ofta med att korrekt särskilja de olika anemimönstren. Den vanligaste avvikelsen var trombocytopeni. Orsaken till trombocytopeni vid babesios kan vara trombocytopeni på grund av trombocytavskiljning i mjälten eller immunmedierad trombocytdestruktion och utveckling av disseminerad intravaskulär koagulation .
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Kahn et al. . | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
2.2. Parasitologisk undersökning
För att skilja mellan dessa möjligheter utfördes den mikroskopiska undersökningen av Giemsa-färgade tunna blodutstryk preparerade från öronranden under oljelins (100x). Undersökningen avslöjade förekomsten av ringformade, ovala, fallskärms- och kommaliknande organismer, ca 1-3 μm i diameter i erytrocyterna (figur 1). På grundval av storleken på de intracellulära parasiterna i detta fall övervägdes möjligheten att hunden har infekterats med små Babesia spp, särskilt med B. gibsoni. Graden av parasitemi, beräknad som andelen infekterade röda blodkroppar genom att räkna 1000 röda blodkroppar, var 10,5 %. De fästingar som fanns på hunden identifierades som Rhipicephalus sanguineus. Det faktum att B. gibsoni inte kan särskiljas från andra isolat av små babesier hos hundar med hjälp av mikroskopi föranledde oss att utföra PCR för slutlig diagnos med hjälp av B. gibsoni-specifik primer .
2.3. DNA-extraktion
DNA från helblod (300 μL) extraherades med hjälp av DNA-rensningskit (QIAGEN, GmbH, Tyskland) enligt tillverkarens anvisningar.
En primeruppsättning med forward primer (Gib599 F): 5′CTCGGCTACTTGCCTTGTC3′ och reverse primer (Gib1270R): 5′GCCGAAACTGAAATAACGGC 3′ användes för att amplifiera ett 671 bp-fragment av 18 S rRNA-genregionen som är specifik för B. gibsoni . PCR-blandningen bestod av 1X molär koncentration av 12,5 µl master mix (1X QIAGEN PCR-buffert, 2,5 enheter Taq DNA-polymeras, 200 µM av varje dNTP och 1,5 mM MgCl2), 1,5 µl av 10 pmol vardera av de respektive primrarna och 5 µl av mallen som DNA-källa.
Efter en inledande denaturering vid 95 °C i 5 minuter genomfördes 30 cykler av denaturering (94 °C i 45 sekunder), glödgning (57 °C i 1 minut) och förlängning (72 °C i 1 minut) och den slutliga förlängningen utfördes vid 72 °C i 8 minuter. En negativ provkontroll (endast DNA från hundblod) och en negativ DNA-kontroll (Milli-Q-vatten i stället för DNA) ingick i PCR-reaktionen. PCR-produkterna kördes på 1,5 % agarosgel och färgades med etidiumbromid. Storleken på den amplifierade PCR-produkten var 671 bp (figur 2).
2.4. Analys av peritonealvätska
Baserat på abdominell distension misstänktes ascites. En peritoneal tabs utfördes och 2 mL klar peritonealvätska samlades upp. Peritonealvätskan undersöktes vanligtvis med avseende på färg, turbiditet, totalprotein- och albuminkoncentration. Vätskan var genomskinlig och klar. Totalprotein och albumin var 0,4 g/dL respektive 0,2 g/dL, vilket tyder på hypoproteinemi (0,4 g/dL) och hypoalbuminemi (0,2 g/dL).
2.5. Radiografi och ultraljud
Radiografi och ultraljud visade på ett slipat glas och ett anekoiskt område i buken respektive (figur 3 och 4). Fallet bekräftades därmed som ascites. Även om de vanligaste kliniska tecknen på babesios är anorexi, letargi, återkommande feber, bleka slemhinnor och kräkningar , visade våra resultat att det är viktigt att inte försumma babesios vid differentialdiagnostik av ascites. Hundar med ascites bör genomgå klassisk parasitologisk eller molekylär diagnostik för att utesluta babesios. Babesia-organismer infekterar erytrocyterna hos hundar och leder till hemolytisk anemi. Infektion med B. gibsoni är känd för att orsaka allvarligare kliniska tecken än infektion med stora Babesia spp. och kan leda till syndrom med dysfunktion i flera organ . Eftersom hunden var allvarligt anemisk med andra allvarliga avvikelser i parametrar relaterade till vitala organ dog den inom två dagar efter behandlingen.
3. Slutsats
Såvitt vi vet är detta den första fallrapporten om peritonealutgjutning hos en hund i samband med B. gibsoni-infektion diagnostiserad genom mikroskopisk undersökning och polymeraskedjereaktion (PCR) i kombination med analys av peritonealvätska, röntgen och ultraljud.
Interessentkonflikter
Författarna förklarar att det inte finns någon intressekonflikt när det gäller publiceringen av denna artikel.