Originalartikel
Jacob Rosenblit, Cláudia Regina Abreu,
Leonel Nulman Szterling, José Mauro Kutner, Nelson Hamerschlak,
Paula Frutuoso, Thelma Regina Silva Stracieri de Paiva,
Orlando da Costa Ferreira Júnior
Utvärdering av tre metoder för hemoglobinmätning hos blodgivare
Hemoterapiservice, Hospital Israelita Albert Einstein, São Paulo, Brasilien
ABSTRACT
KONTEXT: En av de mest använda metoderna för att mäta Hb-nivåer bygger på fotometrisk detektion av cyanmetahemoglobin, som ett alternativ till denna teknik har HemoCue utvecklat en fotometrisk metod som bygger på bestämning av azidmetahemoglobin.
MÅL: Att utvärdera prestandan hos tre metoder för bestämning av hemoglobin (Hb) i en blodbanksmiljö.
DESIGN: Prospektiv studie där man använder blodprover för att jämföra metoder för Hb-bestämning.
SÄTTNING: Hemotherapy Service of the Hospital Israelita Albert Einstein, en privat institution i det tertiära hälso- och sjukvårdssystemet.
SAMMANHÄLLNING: Seriella blodprover samlades in från 259 personer under perioden mars till juni 1996.
MÄNGDEMÄSSNINGAR: Testprestanda och deras jämförelser bedömdes genom analys av variationskoefficienter (CV), linjär regression och medeldifferenser.
RESULTAT: CV för de tre metoderna var: Coulter 0,68 %, Cobas 0,82 % och HemoCue 0,69 %. Det fanns ingen skillnad mellan den genomsnittliga Hb-bestämningen för de tre metoderna (p>0,05). Metoderna Coulter och Cobas visade den bästa överensstämmelsen och HemoCue-metoden gav en lägre Hb-bestämning jämfört med både Coulter- och Cobas-metoden. Metodpar med HemoCue verkar dock ha smalare gränser för överensstämmelse (± 0,78 och ± 1,02) än Coulter- och Cobas-kombinationen (± 1,13).
KONKLUSION: De tre metoderna ger god överensstämmelse för hemoglobinbestämning.
NYckelord: Hemoglobin. Metoder. Kvantifiering. Utrustning.
INLEDNING
Hemoglobinnivån (Hb) är den mest använda parametern för screening av blodgivare för förekomst av anemi. Denna mätning utförs vanligen under den klinisk-epidemiologiska intervju som föregår blodgivningen.
En av de mest använda metoderna för att mäta Hb-nivåerna är för närvarande baserad på fotometrisk detektion av cyanmetahemoglobin, som är en stabil förening som härrör från Hb. Dessutom finns färdiga reagenser, liksom cyanmetahemoglobinstandardlösning för kalibrering, kommersiellt tillgängliga.
Som ett alternativ till denna teknik har HemoCue utvecklat en fotometrisk metod som bygger på bestämning av azidmetahemoglobin,1 som är standardiserad mot ICSH-metoden (International Committee for Standardization in Hematology).2 Azidmetahemoglobinet mäts vid 570 nm. För att kompensera för turbiditet, t.ex. på grund av lipider, görs en andra mätning vid 880 nm.3 Fördelen med denna teknik är att den är enkel, snabb och inte kräver sofistikerad hematologisk utrustning. Systemet är utformat för att använda kapillärt, venöst eller arteriellt blod. Dessutom är instrumentet litet och bärbart, vilket gör att det kan användas i mobila blodinsamlingsenheter och på läkarmottagningar.
Flera studier som utförts på amerikanska blodgivare har vittnat om HemoCue-metodens goda reproducerbarhet och noggrannhet.4,5 Jämförelse av Hb-nivån som mäts med HemoCue-metoden med annan, nyare tillgänglig hematologisk utrustning har dock inte utförts.
I den här studien har vi granskat HemoCue-systemets prestanda i jämförelse med Coulter- och Cobas-metoderna. Båda dessa metoder bygger på detektion av cyanmetahemoglobin.
METODER
Provval. Totalt 259 blodprover samlades in under perioden mars-juni 1996. Blodet samlades in med Vacutainer-systemet, innehållande EDTA-K3 (Becton-Dickinson) till en total volym på 4,5 ml.
Hb-mätningar. För de 259 proverna utfördes med de tre metoderna inom ett intervall på 10-20 minuter för att undvika variation under behandling och mätning. För analysen av Hb-mätningarnas reproducerbarhet använde vi ett enda prov som utvärderades 10 gånger med varje metod. Utifrån dessa bestämningar beräknade vi variationskoefficienten (CV) som definieras som förhållandet mellan standardavvikelsen och medelvärdet av Hb-nivåerna, multiplicerat med 100. Coulter och Cobas kalibrerades dagligen enligt tillverkarens rekommendation. HemoCue-fotometern är fabrikskalibrerad och bör inte omkalibreras. Kalibreringen kontrollerades dagligen enligt tillverkarens rekommendation. Kalibreringen var stabil under vår studieperiod.
Statistiska metoder. Alla statistiska analyser utfördes i sharewareprogrammet EPIINFO, version 6 (linjär regressionsanalys, Student t-test, beräkning av medelvärde och standardavvikelse).6 Ett p-värde mindre än 0,05 ansågs vara statistiskt signifikant.
RESULTAT
Reproducerbarheten för varje metod utvärderades genom att mäta Hb-nivån 10 gånger från ett enda blodprov och bestämma variationskoefficienten (CV) för varje analys. CV för Coulter-, Cobas- och HemoCue-metoderna var 0,68 %, 0,82 % respektive 0,69 % (tabell 1).
Vi bedömde först mätningarna av central tendens (medelvärde och median) och variation (intervall och standardavvikelse) för de 259 Hb-bestämningarna från varje metod. Som framgår av tabell 2 kunde vi inte hitta någon statistisk skillnad för dessa parametrar. Vi observerade dock att HemoCue-metoden uppvisade det lägsta medelvärdet (11,5 g/dl) och den lägsta medianen (11,4 g/dl) jämfört med både Coulter- och Cobas-metoden (medelvärde = 11,6 och median = 11,7 respektive 11,6 g/dl).
Vi studerade därefter korrelationskoefficienten för metodpar, från den linjära regressionsanalysen av Hb-bestämningen för de tre metoderna. Tabell 3 visar parametrarna för denna analys och visar att varje par hade en utmärkt korrelationskoefficient (intervall 0,97-0,99). Detta resultat var i viss mån väntat eftersom alla tre metoderna var utformade för att mäta samma parameter (Hb-nivå i g/dl). Under denna omständighet representeras överensstämmelsen mellan två variabler inte korrekt genom att mäta styrkan i deras förhållande, eller statistiskt sett genom att bestämma korrelationskoefficienten för den linjära regressionen.
Därför bestämde vi oss för att utvärdera överensstämmelsen mellan de tre metoderna för bestämning av Hb med hjälp av det tillvägagångssätt som föreslagits av Bland och Altman.7 Kortfattat utgår man i detta tillvägagångssätt från att om två metoder ska överensstämma så ska medelvärdet av skillnaden mellan varje parvis bestämning inte vara statistiskt annorlunda än noll. Genom att använda detta tillvägagångssätt är det också möjligt att fastställa en gräns för överensstämmelse (inom ett givet konfidensintervall) mellan de två metoderna och att grafiskt visualisera spridningen av dessa skillnader mellan olika Hb-nivåer. Detta skulle till exempel kunna indikera om större variabilitet kan vara förknippad med ett visst intervall av Hb-bestämningar och därmed antyda en brist på precision förknippad med detta Hb-intervall.
Användningen av Bland och Altman-metoden på våra data visas i tabell 4. Man kan se att det enda metodpar vars medelvärde för skillnaden inte skiljer sig från noll är Coulter/Cobas-paret (p = 0,588). Detta är därför de metoder som stämmer överens när det gäller Hb-mätningar. Metodpar där HemoCue-metoden ingick gav ett medelvärde för skillnaden som var statistiskt annorlunda än noll (p < 0,001).
Med hjälp av Bland och Altman-metoden kunde vi beräkna gränsen för överensstämmelsen mellan två metoder. Dessa gränser visas också i tabell 4. Paret Coulter/Cobas gav en gräns för överensstämmelse på 1,13 g/dl, medan par där HemoCue-metoden ingår visar lägre gränser för överensstämmelse (Coulter/HemoCue = 0,78 g/dl och Cobas/HemoCue = 1,02 g/dl). Överensstämmelsegränsen återspeglar spridningen av data kring medelvärdet av skillnaden (illustrerad i figur 1).
Figur 1 – Individuella skillnader mellan Hb-värden (n=259) plottades mot det genomsnittliga Hb-värdet som bestämdes av par av Hb-mätmetoder. Varje figur visar plottar av följande skillnader och medelvärden: A, Coulter-Cobas, B, Coulter-HemoCue och C, Cobas-HemoCue. Linjen anger nollskillnaden.
DISKUSSION
Som helhet tyder våra data på att Coulter- och Cobasmetoderna visar den bästa överensstämmelsen och att HemoCue-metoden ger en lägre Hb-bestämning jämfört med både Coulter- och Cobas-metoderna. Denna skillnad är 0,10 och 0,13 g/dl i förhållande till Coulter- respektive Cobas-metoden. Metodpar där HemoCue används tycks dock ha snävare gränser för överensstämmelse än Coulter- och Cobas-kombinationen. Detta stämmer överens med CV för de tre metoderna. Även om HemoCue-metoden visar lägre mätning av Hb-nivåer tycks alltså dessa mätningar fluktuera mindre jämfört med andra metoder.
I den här studien använde vi prover från venös punktion som samlades upp direkt i Vacutainer-rör som innehöll EDTA-K3. Detta gjordes för att standardisera mätningen av Hb. En del av skillnaden på 1 % (0,10 g/dl) mellan HemoCue-systemet och Coulter STKS kan förklaras av att HemoCue-systemet kompenserar för grumlighet i blodprovet. Grumlighet på grund av till exempel lipider kommer att ge falskt förhöjda avläsningar av Coulter och andra instrument som mäter fotometriskt vid endast en våglängd.1,3 ICSH-metoden2 accepterar en grumlighet på 0,003 absorbansenheter, vilket motsvarar 0,11 g/dl hemoglobin. Högre turbiditet förväntas eftersom blodgivare inte fastar.
Det är också möjligt att den biokemiska metod som används för Hb-mätning (cyanmetahemoglobin jämfört med hemoglobinazid) kan ha påverkat vårt resultat. Det bör nämnas att cyanmetahemoglobin är den metod som rekommenderas av ICSH.
Fördelarna med HemoCue-systemet när det gäller snabbhet, enkelhet och bärbarhet skulle rekommendera det som en screeningmetod inte bara i en blodbanksmiljö utan även på läkarens kontor.
2. ICSH. Recommendations for Reference Method for Hemoglobinometry in Human Blood (ICSH-standard 1995) och Specifications for International Hemoglobincyamide Standard (4th edition). J Clin Pathol 1996;49:271-4.
3. Nicholls PD. En utvärdering av HemoCue för korrigering av hemoglobinvärdet i lipemiska prover. Med Lab Sciences 1990;47:226-9.
4. Cable RG. Bestämning av hemoglobin hos blodgivare. Transfusion Med Ver 1995;9:131-44.
5. Carlson DA, Daigneault RW, Statland BE. Utvärdering av HemoCue-fotometern för mätning av blodgivares hemoglobin. Sammanfattning till American Association of Blood Banks 40th anniversary meeting, Orlando, FL, 1987.
7. Bland JM, Altman DG. Statistiska metoder för bedömning av överensstämmelse mellan två metoder för klinisk mätning. Lancet 1986;i:307-10.
Jacob Rosenblit – MD, Hemoterapiservice, Hospital Israelita Albert Einstein.
Cláudia Regina Abreu – BSC, Hemotherapy Service, Hospital Israelita Albert Einstein.
Leonel Nulman Szterling – MD, Hemotherapy Service, Hospital Israelita Albert Einstein.
José Mauro Kutner – MD, Hemotherapy Service, Hospital Israelita Albert Einstein.
Nelson Hamerschlak – MD, Hemotherapy Service, Hospital Israelita Albert Einstein.
Paula Frutuoso – BSc, Hemotherapy Service, Hospital Israelita Albert Einstein.
Thelma Regina Silva Stracieri de Paiva – BSC, Hemotherapy Service, Hospital Israelita Albert Einstein.
Orlando da Costa Ferreira Júnior – MD, PhD. Hemotherapy Service, Hospital Israelita Albert Einstein.
Källor för finansiering: Inte deklarerat
Intressekonflikter: Inte deklarerat
Sista mottagandet:: 1: 15 juni 1998
Antagen: 23 juli 1998
Adress för korrespondens:
Jacob Rosenblit
Hemoterapiservice vid sjukhuset Albert Einstein
Av. Albert Einstein, 627, 4th floor
São Paulo/SP, Brazil – CEP 05651-901
E-post: [email protected]
RESUMO
CONTEXT: Mätning av hemoglobin (Hb) är den mest använda indikatorn för att kontrollera anemi vid screening av blodgivare. Den för närvarande mest använda fotometriska metoden är cyanomethemoglobin. Som ett alternativ till denna teknik har Hemocue utvecklat en fotometrisk metod som bygger på bestämning av azid-metahemoglobin. SYFTE: Utvärdering av tre metoder för bestämning av hemoglobin (Hb) hos blodgivare. STUDIETYP: Prospektiv studie som använder blodprover för att jämföra Hb-doseringstester. LÄGE: Hemotherapy Service of Hospital Israelita Albert Einstein, en privat institution för tertiär vård. SAMPEL: Blodprover togs i serie från 259 personer mellan mars och juni 1996. STUDERADE VARIABLER: Testens prestanda och jämförelser av dem utfördes genom korrelationskoefficientanalys, linjär regression och jämförelse av medelvärden. RESULTAT: Variationskoefficienterna för de tre metoderna var: Coulter, 0,68 %, Cobas, 0,82 % och HemoCue, 0,69 %. Det fanns inga statistiskt signifikanta skillnader mellan medelvärdena för hemoglobinbestämningar med de tre metoderna (p>0,05). Coulter- och Cobas-metoderna visade bättre överensstämmelse medan HemoCue-metoden hade lägre hemoglobinmätningar. Paren Coulter/HemoCue och Cobas/HemoCue hade dock snävare gränser för överensstämmelse (+ 0,78 och + 1,02) än paret Coulter/Cobas (+ 1,13). SLUTSATSER: De tre metoderna visade utmärkt överensstämmelse för hemoglobindosering.